一種定量生物樣品NMN的科學方法
17 1月 2024
1. 引言
補充煙醯胺單核苷酸 （NMN） 以上調煙醯胺腺嘌呤二核苷酸 （NAD+） 的水準已被揭示為一種很有前途的抗衰老干預措施。然而，準確定量NAD+中間體，特別是NMN仍然是一個嚴峻的挑戰。本研究引入了一種新的方法，即雙同位素介導的LC-MS/MS方法（dimeLC-MS/MS），用於生物樣品中NMN的精確定量。2、影響NMN準確檢測的因素
NMN由於易受酶降解、樣品加工轉化、不同色譜柱和提取條件下的複雜行為以及基質效應的影響，難以準確檢測。
具體來說，NMN具有高極性和低揮發性，易溶於水，但難以溶於有機溶劑。這些特性極大地限制了許多常規定量分析方法的應用。
血液等生物樣品具有顯著的CD38和CD73（外-5』-核苷酸酶）活性，兩者都可以使用NMN作為底物。
NMN在色譜柱中的行為非常複雜，可能是因為其電荷的二分性，因此提取和色譜柱條件的細微差異會顯著影響NMN的可靠和準確檢測。
3. 減少影響因數影響的二元LC-MS/MS應對策略
為了避免上述因素的干擾，應用了原型柱NMN-2。該色譜柱含有基於C18的高純度二氧化矽顆粒，其結合能力比碳顆粒更能結合親水性化合物，提高了分離能力。採用高氯酸 （PCA） 是因為它可以有效地從生物樣品（如血漿）中提取 NAD+ 和 NMN，損失最小。
為了調整基質效應，在PCA提取之前，將每種同位素化合物的固定量（1μM）添加到生物樣品中。
4. dimeLC-MS/MS的優點
在LC-MS/MS驅動的方法中，雙同位素NMN標準NMN（M+14）和NMN（M+5）可以精確追蹤NMN在樣品處理過程中的命運，從而顯著提高了生物樣品中NMN測量的準確性和可靠性。此外，dimeLC-MS/MS可以評估不同類型生物樣品中NMN的提取效率和絕對濃度。
5. 結論
這種採用雙同位素NMN標準品的新型LC-MS/MS驅動方法可以準確可靠地測量生物樣品中的NMN。它可用於未來對NMN攝入量的研究。6. 參考資料
Unno， Junya et al. “通過雙同位素介導的液相色譜-串聯質譜法 （dimeLC-MS/MS） 對生物樣品中煙醯胺單核苷酸進行絕對定量。” npj Aging 第 10,1 卷 2.2 1月 2024， doi：10.1038/s41514-023-00133-1為什麼選擇BONTAC？
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