利用超靈敏E|甜葉菊糖檢測登革熱NS1

超靈敏 ELISA 與硫代-NAD 循環在測定登革熱 NS1 蛋白方面的非凡優點

15 1月 2024

1. 引言

登革熱是由登革熱病毒通過受感染的伊蚊（埃及伊蚊或白紋伊蚊）叮咬引起的急性傳染病，主要癥狀包括高燒、頭暈、頭痛、皮疹和劇烈疼痛（眼痛、肌肉痛、關節痛或骨痛）等。這種疾病在熱帶和亞熱帶氣候中廣泛流行。據估計，每年有1億至4億人被感染，其中80%以上通常是輕度和無癥狀的。儘管如此，如果治療不當，嚴重的登革熱會增加死亡風險。因此，該病的早期診斷對其及時治療具有重要意義。值得注意的是，非結構蛋白1（NS1）是一種高度保守的糖蛋白，主要在登革熱病毒感染期間分泌，登革熱病毒被認為是登革熱的主要發病因素。因此，NSI通常被用作早期檢測這種疾病的生物標誌物。本研究採用夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）聯合硫代煙醯胺腺嘌呤二核苷酸（thio-NAD/s-nad）迴圈法（以下簡稱超靈敏ELISA）檢測NSI，然後與NAAT進行比較，確認其檢測準確性。

2. 傳統登革熱檢測方法的優缺點

目前，登革熱主要有四種檢測方法。

病毒分離和鑒定具有很高的特異性，但很耗時，至少需要5天。快速抗原檢測是其他方法中速度最快、最具成本效益的，但靈敏度和特異性相對較低。基於 IgM 和 IgG 的血清學檢測受感染天數的限制，因為檢測必須延遲到抗體水準上升到可檢測的水準。在臨床上，NAAT通常用於通過其高敏感性和特異性的污垢來確定登革熱。然而，這種方法昂貴、費力且容易出現錯誤的陽性，必須由訓練有素的人員進行。為了克服這些方法的缺點，本研究應用了一種新的檢測方法超靈敏ELISA。

3. 硫代-NAD迴圈超靈敏ELISA的工作流程

一對抗體用於捕獲夾心ELISA中的NS1蛋白，並在二抗上標記鹼性磷酸酶。除抗體外，雄甾酮衍生物、3α-羥基類固醇脫氫酶、硫代 NAD 和 NADH 用於構建硫代-NAD 酶循環系統。在硫代-NAD迴圈反應過程中，硫代-NADH以三角形數位方式不斷積累，可以在405nm的吸光度下直接測量。

4. 超靈敏ELISA與NAAT檢測登革熱NS1蛋白的比較

在NAAT中，60個標本為登革熱陽性，25個標本為登革熱陰性。登革熱陽性標本的NAAT迴圈閾值（CT）值為12.42至31.41。在超靈敏 ELISA 中，59 個標本對 NAAT 結果呈陽性，而 25 個標本對 NAAT 結果完全呈陰性。與NAAT相比，超靈敏ELISA的敏感性和特異性分別為98.3%和100%（表2）。在 60 份經 NAAT 確認的登革熱陽性患者標本中，只有 1 份標本在超敏 ELISA 中呈陰性。NAAT數據顯示，該標本為4型DENV感染病例，CT值為21.59。超靈敏ELISA的結果與NAAT結果幾乎完全一致，kappa值為0.972（95%CI：0.917-1.0）。