小鼠坐骨神經中NAD+及其代謝物的定量
10 4月 2024
介紹
煙醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）及其代謝物在衰老和神經退行性變中的關鍵部分已被廣泛認可。為了促進針對衰老和神經退行性疾病的生化研究和干預措施的進展，準確量化NAD+及其在NAD+挽救途徑中的代謝物水準具有重要意義。在這裡，應用一種穩健而準確的LC-MS/MS方法來定量正常和受損小鼠坐骨神經中的NAD +及其代謝物水準。現有NAD+及其代謝物定量方法的局限性
傳統的NAD+及其代謝物定量方法，如HPLC-UV、NMR、毛細管區電泳或比色酶法，在靈敏度、選擇性和間接測量方面面臨各種挑戰。對於現有的細胞或組織NAD+及其代謝物測量的LC-MS/MS檢測，仍有許多困難需要克服，例如運行時間長、色譜保留行為差和峰形不理想。此外，這些方法可以覆蓋 NAD+ 挽救途徑中的一到三種物質。LC-MS/MS方法的修改
在現有LC-MS/MS檢測的基礎上，對色譜條件、替代基質和MS/MS條件進行了修改。具體而言，採用5 μM亞甲基膦酸作為流動相添加劑，明確促進信號強度和峰形。鑒於從未樣品相對清潔和簡單的性質以及它們的體積小，超純水被測試為替代基質。Waters Atlantis Premier BEH C18 AX色譜柱取代了親水作用液相色譜柱和hypercarb色譜柱，其獨特的MaxPeak HPS高性能表面技術（鈍化色譜柱內壁，消除金屬表面）可實現所有分析物的高重現性、峰對稱性和基線分離。此外，MS條件經過優化，以最大限度地減少環磷酸腺苷核糖（cADPR）通道中的NAD+干擾信號，同時保持cADPR和煙醯胺單核苷酸（NMN）的回應，離子噴霧電壓為4000V，渦輪加熱器溫度為450°C，氣體1為50 psi，氣體2為50 psi，簾氣為30 psi，碰撞氣體為12 psi。
神經樣本的代表性色譜圖（正常與受傷）
所有五種分析物均達到基線分離，其中 cADPR 是神經退行性變模型中的敏感生物標誌物。在這裡，坐骨神經軸突切斷術誘導軸突變性，導致受損神經中 NAD+ 水準降低和 NMN 水準升高，導致 NMN/NAD+ 比值增加約 2 倍。同時，煙醯胺（NAM）和二磷酸腺苷核糖（ADPR）的水準降低了約2倍，而cADPR水準提高了8倍以上。這些結果與先前報導的研究結果一致，驗證了這種改良的LS-MS/MS方法在定量NAD+及其代謝物方面的準確性。
結論
這種改良的 LC-MS/MS 方法能夠在 5 分鐘的短暫運行時間內有效分離 NAD+、NMN、NAM、ADPR 和 cADPR，這有助於各種神經系統疾病的早期診斷以及衰老和神經退行性疾病的藥物開發。參考
馬 Y， 鄧 L， Du Z. 用於定量小鼠坐骨神經中 NAD+ 和相關代謝物的 LC-MS/MS 方法的開發和驗證及其在神經損傷動物模型中的應用。色譜學雜誌 doi：10.1016/j.chroma.2024.464821邦塔克納德
BONTAC自2012年以來一直致力於輔酶和天然產物原料的研發、製造和銷售，擁有自有工廠、170多項全球專利以及強大的研發團隊。BONTAC在NAD及其前體的生物合成方面擁有豐富的研發經驗和先進的技術（例如。NMN 和 NR）。NAD有多種類型可供選擇，包括NAD ER級（去除內毒素）、NAD I級（IVD/膳食補充劑/化妝品原料粉）、NAD II級（API/中間體）和NAD IV級（如果對溶解度有更高的要求），可以凍乾粉或結晶粉的形式提供。BONTAC NAD的純度可達98%以上。
