En vitenskapelig metode for å kvantifisere NMN i biologiske prøver

1. Innledning

Tilskudd avnikotinamidmononukleotid (NMN)å oppregulere nivået av nikotinamidadenindinukleotid (NAD+) har blitt avduket for å være en lovende anti-aldringsintervensjon. Imidlertid er det fortsatt en alvorlig utfordring å nøyaktig kvantifisere NAD+-mellomprodukter,NMNspesielt. Denne studien er drevet til å introdusere en ny metode, dobbel isotop-mediert LC-MS/MS-metodikk (dimeLC-MS/MS), for presis kvantifisering avNMNi biologiske prøver.

2. Faktorer som påvirker nøyaktig påvisning av NMN

NMN er vanskelig å oppdage nøyaktig på grunn av dets sårbarhet for enzymatisk nedbrytning, konvertering i prøvebehandling, dets komplekse oppførsel under forskjellige kolonne- og ekstraksjonsforhold, samt matriseeffekt.


Nærmere bestemt har NMN egenskapene til høy polaritet og lav flyktighet, som er lett å oppløse i vann, men vanskelig å oppløse i organiske løsningsmidler. Disse egenskapene begrenser i stor grad bruken av mange konvensjonelle kvantitative analysemetoder.

Biologiske prøverfor eksempelblod har betydelige aktiviteter av CD38 og CD73 (ecto-5’-nukleotidase), som begge kan bruke NMN som substrat.

Oppførselen til NMN i kolonnen er svært kompleks, sannsynligvis på grunn av den todelte karakteren av ladningene, slik at subtile forskjeller i ekstraksjon og kolonneforhold betydelig påvirker pålitelig og nøyaktig deteksjon av NMN.

3. Mestringsstrategier fordimeLC-MS/MSå redusere virkningen av påvirkningsfaktorer

For å unngå interferens fra ovennevnte faktorer, brukes en prototypekolonne NMN-2. Denne kolonnen inneholder C18-baserte silikapartikler med høy renhet som er mer i stand til å binde hydrofile forbindelser enn karbonpartikler, noe som forbedrer separasjonsevnen.

Perklorsyre (PCA) brukes siden den effektivt kan trekke ut NAD+ og NMN fra biologiske prøver som plasma med minimale tap.

For å justere for matriseeffekter tilsettes en fast mengde (1 μM) av hver isotopforbindelse til biologiske prøver før PCA-ekstraksjonen.

4. Fordelensav dimeLC-MS/MS

Doble isotopiske NMN-standarder, NMN (M + 14) og NMN (M + 5), i den LC-MS/MS-drevne metodikken kan nøyaktig spore skjebnen til NMN under prøvebehandling, noe som øker nøyaktigheten og påliteligheten til NMN-måling i biologiske prøver betydelig. Dessuten kan dimeLC-MS/MS evaluere ekstraksjonseffektiviteten og de absolutte konsentrasjonene av NMN i forskjellige typer biologiske prøver.

5. Konklusjon

Therny LC-MS/MS-drevet metodikk med doble isotopiske NMN-standarder kan nøyaktig og pålitelig måle NMN i biologiske prøver.Den kan brukes til fremtidige studier av NMN-inntak.

6. Referanse

Unno, Junya et al. "Absolutt kvantifisering av nikotinamidmononukleotid i biologiske prøver ved dobbel isotopmediert væskekromatografi-tandem massespektrometri (dimeLC-MS / MS)." npj aldring vol. 10,1 2. 2. januar 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1

Hvorfor velgeBONTAC?

BONTACer ledende på det globaleNMNindustri. Vi har den første helenzymkatalyseteknologien i Kina, og har blitt den ledende bedriften innen koenzymprodukter som er mye brukt i helseindustrien, medisinsk og skjønnhet, grønt landbruk, biomedisin og andre felt. Spesielt er BONTAC NMNråvareleverandør til det berømte David Sinclair-teamet ved Harvard University. Våre tjenester og produkter er pålitelige. DessutenBONTAChar et uavhengig forskningssenter for koenzymteknologi på provinsnivå i Kina og selveide fabrikker, hvor renheten og stabiliteten til produktene kan sikres.

Ansvarsfraskrivelse

Therartikkelen erbasert på referansen iakademisk tidsskrift. Den relevante informasjonen erskaffekun for delings- og læringsformål, og representerer ikke noen medisinske rådgivningsformål. Hvis det er noen overtredelse, vennligstkontaktforfatterenforDeletion. Synspunktene uttrykt i denne artikkelen representerer ikke posisjonen tilBONTAC.